醫(yī)院消毒供應(yīng)室的工藝監(jiān)測(cè)
醫(yī)院消毒是預(yù)防醫(yī)院內(nèi)感染的重要措施之一，消毒效果的監(jiān)測(cè)是評(píng)價(jià)其消毒方法是否合理、消毒效果是否可靠的手段，因而在醫(yī)院消毒工作中至關(guān)重要。 醫(yī)院消毒效果監(jiān)測(cè)時(shí)需遵循以下原則：監(jiān)測(cè)人員需經(jīng)過(guò)專業(yè)培訓(xùn)，掌握一定的消毒知識(shí)，具備熟練的檢驗(yàn)技能；選擇合理的采樣時(shí)間(消毒后、使用前)；遵循嚴(yán)格的無(wú)菌操作。 20.2 熱力滅菌效果的監(jiān)測(cè)方法 20.2.1 壓力蒸汽滅菌效果監(jiān)測(cè)方法 20.2.1 化學(xué)監(jiān)測(cè)法 (1)化學(xué)指示卡(管)監(jiān)測(cè)方法：將既能指示溫度，又能指示溫度持續(xù)時(shí)間的化學(xué)指示管(卡)放人每一待滅菌的物品包中央，經(jīng)一個(gè)滅菌周期后，取出指示管(卡)，根據(jù)其顏色及性狀的改變判斷是否達(dá)到滅菌條件。 (2)化學(xué)指示膠帶監(jiān)測(cè)法：將化學(xué)指示膠帶粘貼于每一待滅菌物品包外，經(jīng)一個(gè)滅菌周期后，觀察其顏色的改變，以指示是否經(jīng)過(guò)滅菌處理。 (3)結(jié)果判定：檢測(cè)時(shí)，所放置的指示管(卡)的性狀或顏色均變至規(guī)定的條件，可認(rèn)為該包滅菌合格。 (4)注意事項(xiàng)：監(jiān)測(cè)所用化學(xué)指示劑須經(jīng)衛(wèi)生部批準(zhǔn)，并在有效期內(nèi)使用。 20.2.1.2 生物監(jiān)測(cè)法 (1)指示菌株：指示菌株為嗜熱脂肪桿菌芽胞(ATCC7953或SSIK31株)，菌片含菌量為5.0X105-5.0x106cfu/片，在121℃±0.5℃條件下，D值為13-1.9min，殺滅時(shí)間(KT值)≤19min，存活時(shí)間(ST值)為≥3.9min。 (2)培養(yǎng)基：試驗(yàn)用培養(yǎng)基為溴甲酚紫蛋白胨水培養(yǎng)基。 (3)檢測(cè)方法：將兩個(gè)嗜熱脂肪桿菌芽胞菌片分別裝人滅菌小紙袋內(nèi)，置于標(biāo)準(zhǔn)試驗(yàn)包中心部位。 滅菌柜室內(nèi),排氣口上方放置一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)試驗(yàn)包(由3件平紋長(zhǎng)袖手術(shù)衣，4塊小手術(shù)巾，2塊中手術(shù)巾，1塊大手術(shù)中，3O塊10cm x 10cm8層紗布敷料包裹成25cm X 30cm x 30cm大小)。手提壓力蒸汽滅菌器用通氣貯物盒(22cm x 13cm x 6cm)代替標(biāo)準(zhǔn)試驗(yàn)包，盒內(nèi)盛滿中試管，指示菌片放于中心部位的兩只滅菌試管內(nèi)(試管口用滅菌牛皮紙包封)，將貯物盒平放于手提壓力蒸汽滅菌器底部。 經(jīng)一個(gè)滅菌周期后，在無(wú)菌條件下，取出標(biāo)準(zhǔn)試驗(yàn)包或通氣貯物盒中的指示菌片，投人溴甲酚紫蛋白胨水培養(yǎng)基中，經(jīng)56℃培養(yǎng)7天(自含式生物指示物按說(shuō)明書(shū)執(zhí)行)，觀察培養(yǎng)基顏色變化。檢測(cè)時(shí)設(shè)陰性對(duì)照和陽(yáng)性對(duì)照。 (4)結(jié)果判定：每個(gè)指示菌片接種的溴甲酚紫蛋白胨水培養(yǎng)基都不變色，判定為滅菌合格；指示菌片之一接種的溴甲酚紫蛋白胨水培養(yǎng)基，由紫色變?yōu)辄S色時(shí)，則滅菌不合格。 (5)注意事項(xiàng)：監(jiān)測(cè)所用菌片須經(jīng)衛(wèi)生部認(rèn)可，并在有效期內(nèi)使用。 20 .2.2 干熱滅菌效果監(jiān)測(cè)方法 20.2.2.1 化學(xué)檢測(cè)法 (1)檢測(cè)方法：將既能指示溫度又能指示該溫度持續(xù)時(shí)間的化學(xué)指示劑分別放人待滅菌的物品中。經(jīng)一個(gè)滅菌周期后，取出化學(xué)指示劑，據(jù)其顏色及性狀的改變判斷是否達(dá)到滅菌條件。 (2)結(jié)果判定：檢測(cè)時(shí)，所放置的指示管的顏色及性狀均變至現(xiàn)定的條件，則可認(rèn)為該包達(dá)到滅菌條件。 (3)注意事項(xiàng)：檢測(cè)所用的化學(xué)指示劑需經(jīng)衛(wèi)生部認(rèn)可，并在有效期內(nèi)使用。 20.2.2.2 物理檢測(cè)法：(熱電偶檢測(cè)法) (l)檢測(cè)方法：檢測(cè)時(shí)，將多點(diǎn)溫度檢測(cè)儀的多個(gè)探頭分別放于滅菌器各層內(nèi)、中、外各點(diǎn)。關(guān)好柜門(mén)；將導(dǎo)線引出，由記錄儀中觀察溫度上升與持續(xù)時(shí)間。 (2)結(jié)果判定：若所示溫度(曲線)達(dá)到預(yù)定溫度，則滅菌溫度合格。 20.2.2.3 生物檢測(cè)法： (1)指示菌株：枯草桿菌黑色變種芽胞(ATCC9372)，菌片含菌量為5.0XI05一5.0XI06cfu/片。其抗力應(yīng)符合以下條件：在溫度160±2℃時(shí)，其D值為1.3-1.9min，存活時(shí)間≥3.9min，死亡時(shí)間 ≤1.9min。 (2)檢測(cè)方法：將枯草桿菌芽胞菌片分別裝人滅菌中試管內(nèi)(1片/管)。滅菌器與每層門(mén)把手對(duì)角線內(nèi)，外角處放置2個(gè)含菌片的試管，試管帽置于試管旁，關(guān)好柜門(mén)，經(jīng)一個(gè)滅菌周期后，待溫度降至80℃時(shí)，加蓋試管帽后取出試管。在無(wú)菌條件下，加人普通營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基(5ml/管)，以37℃培養(yǎng)48h，觀察初步結(jié)果，無(wú)菌生長(zhǎng)管繼續(xù)培養(yǎng)至第七日。 (3)結(jié)果判定：若每個(gè)指示菌片接種的肉湯管均澄清，判為滅菌合格，若指示菌片之一接種的肉湯管混濁，判為不合格，對(duì)難以判定的肉湯管，取0.1ml接種于營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板，用滅菌L棒涂勻，放37℃培養(yǎng)48h，觀察菌落形態(tài)，并做涂片染色鏡檢，判斷是否有指示菌生長(zhǎng)；若有指示菌生長(zhǎng)，判為滅菌不合格；若無(wú)指示菌生長(zhǎng)，判為滅菌合格。 (4)注意事項(xiàng)：檢測(cè)所用的指示菌片需經(jīng)衛(wèi)生部認(rèn)可，并在有效期內(nèi)使用。 20.3 紫外線消毒效果的監(jiān)測(cè) 20.3.1 紫外線燈管輻照度值的測(cè)定 1)檢測(cè)方法：開(kāi)啟紫外線燈5min后，將測(cè)定波長(zhǎng)為254nm的紫外線輻照計(jì)探頭置于被檢紫外線燈下垂直距離1m的中央處，待儀表穩(wěn)定后，所示數(shù)據(jù)即為該紫外線燈管的輻照度值。 (2)結(jié)果判定：普通30w。直管型紫外線燈，新燈輻照強(qiáng)度≥90Uw/cm2為合格；使用中紫外線燈輻照強(qiáng)度≥70Uw/cm2對(duì)為合格；30W高強(qiáng)度紫外線新燈的輻照強(qiáng)度≥180 Uw/cm2行為合格。 (3)注意事項(xiàng)：測(cè)定時(shí)電壓220v土5v，溫度20一25℃，相對(duì)濕度<60%，紫外線輻照計(jì)必須在計(jì)量部門(mén)檢定的有效期內(nèi)使用。 20.3.2 生物監(jiān)測(cè)法 (1)空氣消毒效果監(jiān)測(cè)：監(jiān)測(cè)按20.7執(zhí)行。 ①表面消毒效果監(jiān)測(cè)：監(jiān)測(cè)按20.6執(zhí)行。 20.4 醫(yī)療器械滅菌效果的監(jiān)測(cè) 20.4.1 采樣時(shí)間：在滅菌處理后，存放有效期內(nèi)采樣。 20.4.2 常規(guī)監(jiān)測(cè) (1)檢測(cè)方法：用無(wú)菌的方法將擬檢縫合針、針頭、手術(shù)刀片等小件醫(yī)療器械各5支，分別投人5ml的無(wú)茵洗脫液中；注射器則取5副在5ml無(wú)菌肉湯中分別抽吸5次；手術(shù)鉗、鑷子等大的醫(yī)療器械在無(wú)菌操作下取2份以上用沾有無(wú)菌洗脫液的棉拭子反復(fù)涂擦采樣，并將棉拭子投入5ml無(wú)菌洗脫液中。將采樣管用力振打80次，用無(wú)菌吸管吸取lml待檢樣品放于滅菌平皿內(nèi)，加人已熔化的45℃-48℃的營(yíng)養(yǎng)瓊脂15-18ml，邊傾注邊搖勻，待瓊脂凝固，置37℃溫箱培養(yǎng)48h，計(jì)數(shù)菌落數(shù)。 (2)結(jié)果判定：平板上無(wú)菌生長(zhǎng)為滅菌合格。 (3)注意事項(xiàng)：若消毒因子為化學(xué)消毒劑時(shí)，采樣液中應(yīng)加人相應(yīng)中和劑。 20.4.3 無(wú)菌檢驗(yàn) 20.4.3.1 無(wú)菌檢驗(yàn)前準(zhǔn)備 20.4.3.2 無(wú)菌操作：取縫合針、針頭、刀片等小件醫(yī)療器械5件直接浸人6管需一厭氧培養(yǎng)管(其中一管作陽(yáng)性對(duì)照)與4管霉菌培養(yǎng)管C培養(yǎng)基用量為15ml/管。 取5副注射器，在5ml洗脫液中反復(fù)抽吸5次，洗下管內(nèi)細(xì)菌，混和后接種需一厭養(yǎng)菌培養(yǎng)管(共6管，其中1管作陽(yáng)性對(duì)照)與霉菌培養(yǎng)管(共4管)。接種量：lml注射器為0.5ml，2ml注射器為Iml，5-10ml注射器為2ml，20-50ml注射器為5ml，培養(yǎng)基用量：接種量為2ml以下為15ml/管，接種量5ml為40ml/管。 手術(shù)鉗、鑷子等大件醫(yī)療器械取2件用沾有無(wú)菌洗脫液的棉拭子反復(fù)涂抹采樣，將棉拭子投人sml無(wú)菌洗脫液中，將采樣液混勻，接種于需一厭氧培養(yǎng)管(共6管，其中1管作陽(yáng)性對(duì)照)與霉菌培養(yǎng)基(共4管)。接種量為lml/管，培養(yǎng)基用量為15ml/管。 20.4.3.3 培養(yǎng)：在待檢樣品的需一厭氧培養(yǎng)管中，接種預(yù)先準(zhǔn)備的金黃色葡萄球菌陽(yáng)性對(duì)照管液1：1000稀釋1ml，將需一厭氧培養(yǎng)管以及陽(yáng)性與陰性對(duì)照管均于30-35℃培養(yǎng)5天，霉菌培養(yǎng)管與陰性對(duì)照管于20-25℃培養(yǎng)7天，培養(yǎng)期間逐日檢查是否有菌生長(zhǎng)，如加人供試品后培養(yǎng)基出現(xiàn)混濁或沉淀，經(jīng)培養(yǎng)后不能從外觀上判斷時(shí)，可取培養(yǎng)液轉(zhuǎn)種人另一支相同的培養(yǎng)基中或斜面培養(yǎng)基上，培養(yǎng)48-72h后，觀察是否再現(xiàn)混濁或在外面上有無(wú)菌落生長(zhǎng)，并在轉(zhuǎn)種的同時(shí)，取培養(yǎng)液少量，涂片染色，用顯微鏡觀察是否有菌生長(zhǎng)。 20.4.3.4 結(jié)果判定：陽(yáng)性對(duì)照在24h內(nèi)應(yīng)有菌生長(zhǎng)，陰性對(duì)照在培養(yǎng)期間應(yīng)無(wú)菌生長(zhǎng)，如需一厭氧菌及霉菌培養(yǎng)管內(nèi)均為澄清或更顯混濁但經(jīng)證明并非有菌生長(zhǎng)，判為滅菌合格；如需一厭氧菌及霉菌培養(yǎng)管中任何1管顯混濁并證實(shí)有菌生長(zhǎng)，應(yīng)重新取樣，分別同法復(fù)試2次，除陽(yáng)性對(duì)照外，其他各管均不得有菌生長(zhǎng)，否則判為滅菌不合格。 20.4.4 注意事項(xiàng) (1)送檢時(shí)間不得超過(guò)6h，若樣品保存于0-4℃，則不超過(guò)24h。 (2)被采樣本表面積<100cm2取全部表面；被采樣本表面積 ≥ 100Cm2，取 100cm2。 (3)若消毒因子為兒學(xué)消毒劑，采樣液中應(yīng)加人相應(yīng)中和劑。 20.4.5 熱原檢查法： 20.4.5.鱟試驗(yàn) 20.4.5.2 動(dòng)物試驗(yàn)法 (1)原理：將一定劑量的供試品，在規(guī)定的時(shí)間內(nèi)，觀察家兔體溫升高情況，以判定供試品中所含熱原的限度是否符合規(guī)定。 (2)供試家兔：試驗(yàn)用的家兎應(yīng)健康無(wú)傷；體重1.7-3.0kg，雌兔應(yīng)無(wú)孕。預(yù)測(cè)體溫前7日起，即應(yīng)用同一飼料飼養(yǎng)。在此期間內(nèi)，體重應(yīng)不減輕，精神、食欲、排泄等不得有異?，F(xiàn)象。未經(jīng)使用于熱原檢查的家兔，或供試品判定為符合規(guī)定，但組內(nèi)升溫達(dá)06T的家兔；或供試品判定為不符合規(guī)定，但其組內(nèi)家兔平均升溫未達(dá)0.8℃，且已休息兩周以上的家兔；或三周內(nèi)未曾使用的家兔，均應(yīng)在檢查供試品前3-7日內(nèi)預(yù)測(cè)體溫，進(jìn)行挑選。挑選試驗(yàn)的條件與檢查供試品時(shí)相同；僅不注射藥液，每隔lh測(cè)量體溫1次，共測(cè)4次，4次體溫均在38.0-39.6℃的范圍內(nèi)，且最高最低體溫的差數(shù)不超過(guò)0.4℃的家兔，方可供熱原檢查用。用于熱原檢查后的家兔，如供試品判定為符合規(guī)定，至少休息2日方可供第2次檢查用。用于熱原檢查后的家兔，如供試品判定為不符合規(guī)定，且其組內(nèi)家兔平均升溫達(dá)0.8℃或更高時(shí)，則組內(nèi)全部家兔不再使用，每一家兔的使用次數(shù)，用于一般藥品的檢查，不應(yīng)超過(guò)10次。 (3)試驗(yàn)前的準(zhǔn)備：在作熱原檢查前l(fā)-2日，供試用家兔應(yīng)盡可能處于同一溫度的環(huán)境中，實(shí)驗(yàn)室和飼養(yǎng)室的溫度相差不得大于5℃，實(shí)驗(yàn)室的溫度應(yīng)在17-28℃，在試驗(yàn)全部過(guò)程 中，應(yīng)注意室溫變化不得大于3℃，應(yīng)避兔噪音干擾。家兔在試驗(yàn)前至少lh開(kāi)始停止給食并置于適宜的裝置中，直至試驗(yàn)完畢c家兔體溫應(yīng)使用精密度為±0.1℃的肛溫計(jì)，或其他同樣精確的測(cè)溫裝置。肛溫計(jì)插人肛門(mén)的深度和時(shí)間各兔應(yīng)相同，深度一般約為6cm，時(shí)間不得少于Imin，每隔30-60min測(cè)量體溫1次，一般測(cè)量2次，兩次體溫之差不得超過(guò)0.2℃，以此兩次體溫的平均值作為該兔的正常體溫。當(dāng)日使用的家兔，正常體溫應(yīng)在38.0-39.6℃的范圍內(nèi)，且各兔間正常體溫之差不得超過(guò)l℃。 (4)試驗(yàn)用的注射器、針頭及一切和供試品溶液接觸的器皿，應(yīng)置烘箱中用250℃加熱30min或用180℃加熱2h，也可用其他適宜的方法除去熱原。 (5)檢查法：取適用的家兔3只，測(cè)定其正常體溫后15min內(nèi)，自耳靜脈緩緩注人規(guī)定劑量并溫?zé)嶂良s38℃的供試品溶液，然后每隔lh 按前法測(cè)量其體溫1次，共測(cè)3次，以3次體溫中最高一次減去正常體溫，即為該兔體溫的升高度數(shù)。如 3只家兔中有 1只體溫升高 0.6℃或0.6℃以上，或 3只家兔體溫升高均低于 0.6℃，但升高的總數(shù)達(dá) l.4℃或 l.4℃以上，應(yīng)另取 5只家兔復(fù)試，檢查方法同上。 (6)結(jié)果判定：在初試3只家兔隊(duì)體溫升高均低于0.6℃，并且3只家兔體溫升高總數(shù)低于1.4℃，或在復(fù)試的5只家兔中，體溫升高0.6℃或0.6℃以上的兔數(shù)僅有1只，并且初試，復(fù)試合并8只家兔的體溫升高總數(shù)為3.5℃或3.5℃以下，均認(rèn)為供試品符合熱原檢查條例規(guī)定。 在初試3只家兔中，體溫升高0.6℃或0.6℃以上的家兔超過(guò)1只，或在復(fù)試的5只家兔中；體溫升高0.6℃或0.6℃以上的兔數(shù)超過(guò)1只，或在初試、復(fù)合并8只家兔的體溫升高總數(shù)超過(guò)3.5℃，均認(rèn)為供試品的熱原檢查不符合規(guī)定。 20.5 手和皮膚粘膜消毒效果監(jiān)測(cè) 20.5.1 采樣時(shí)間；在消毒后立即采樣。 20.5.2 采樣方法 (1)手的采樣：被檢人五指并攏，用浸有含相應(yīng)中和劑的無(wú)菌洗脫液的棉拭子在雙手指屈面從指根到指端往返涂擦2次(一只手涂擦面積約30cm2)，并隨之轉(zhuǎn)動(dòng)采樣棉拭子，剪去操作者手接觸部位，將棉拭子投人10ml含相應(yīng)中和劑的無(wú)菌洗脫液試管內(nèi)，立即送檢。 (2)皮膚粘膜采樣：用 5cm × 5crn滅菌現(xiàn)格板，放在被檢皮膚處；用沒(méi)有含相應(yīng)中和劑的無(wú)菌洗脫液的棉拭子1支，在規(guī)格板內(nèi)橫豎往返均勻涂擦各5次，并隨之轉(zhuǎn)動(dòng)棉拭子，剪去手接觸部位后，將棉拭子投人10ml含相應(yīng)中和劑的無(wú)菌洗脫液的試管內(nèi)，立即送檢。不規(guī)則的粘膜皮膚處可用棉拭子直接涂擦采樣。 20.5. 3 檢測(cè)方法 (1)細(xì)菌總數(shù)檢測(cè)：將采樣管用力振打80次，用無(wú)菌吸管吸取1.0ml待檢樣品接種于滅菌平皿內(nèi)加人已熔化的45-48℃的營(yíng)養(yǎng)瓊脂15-18ml，邊傾注邊搖勻，待瓊脂凝固，置37℃溫箱培養(yǎng)48h，計(jì)數(shù)菌落數(shù)。 采樣結(jié)果計(jì)算方法： 細(xì)菌總數(shù)(cfu/cm2)=平板上菌落數(shù)×稀釋倍數(shù)/采樣面積(cm2) (2)致病菌檢測(cè)：致病菌檢測(cè)按2015原則執(zhí)行。 20.5.4 結(jié)果判定 (1)消毒洗手 l、ll類區(qū)域工作人員：細(xì)菌總數(shù)≤5Cfu/Cm2，并未檢出致病菌為消毒合格。 lll類區(qū)域工作人員：細(xì)菌總數(shù)≤10 Cfu/Cm2，并未檢出致病菌為消毒合格。 lV類區(qū)域工作人員：細(xì)菌總數(shù) ≤15 Cfu/Cm2，并未檢出致病菌為消毒合格。 母嬰同室＼嬰兒室、新生兒室及兒科病房的工作人員手上，不得檢出沙門(mén)氏菌及其它致病菌。 (2)皮膚粘膜：參照手的衛(wèi)生學(xué)標(biāo)準(zhǔn)執(zhí)行。 20.5.5 注意事項(xiàng) 皮膚粘膜采樣處，若表面不足 5cm × 5cm可用相應(yīng)面積的規(guī)格板采樣。 20.6 物品和環(huán)境表面消毒效果的監(jiān)測(cè) 20.6.1 采樣時(shí)間：在消毒處理后進(jìn)行采樣。 20.6.2 采樣方法：用5cm×5cm滅菌規(guī)格板，放在被檢物體表面，采樣面積≥100cm2，連續(xù)采樣4個(gè)，用浸有含相應(yīng)中和劑的無(wú)菌洗脫液的棉拭于1支；在規(guī)格板內(nèi)橫豎往返均勻涂擦各5次，并隨之轉(zhuǎn)動(dòng)棉拭子，剪去手接觸部位后，將棉拭子投人10ml含相應(yīng)中和劑的無(wú)菌洗脫液試管內(nèi)，立即送檢。 門(mén)把手等不規(guī)則物體表面用棉拭子直接涂擦采樣。 20.6.3 檢測(cè)方法 (1)細(xì)菌總數(shù)檢測(cè)：檢測(cè)方法按20.5.3(1)執(zhí)行。小型物體表面的結(jié)果計(jì)算，用cfu/件表示。 (2)致病菌檢測(cè)：檢測(cè)方法按 20 .14執(zhí)行。 20.6.4 結(jié)果判定 l、ll類區(qū)域：細(xì)菌總數(shù)≤5cfu/Cm2，并未檢出致病菌為消毒合格。 Ill類區(qū)域：細(xì)菌總數(shù)≤10 cfu/Cm2，并未檢出致病菌為消毒合格。 lV類區(qū)域：細(xì)菌總數(shù)≤15 cfu/Cm2，并未檢出致病菌為消毒合格。 母嬰同室、早產(chǎn)兒室、嬰兒室、新生兒室及兒科病房的物體表面不得檢出沙門(mén)氏菌。 20.6.5 注意事項(xiàng) (1)送檢時(shí)間：按20.4.4(1)執(zhí)行。 (2)采樣面積；按20.4.4(2)執(zhí)行。 20.7 空氣消毒效果的監(jiān)測(cè) 20.7.1 采樣時(shí)間：在消毒處理后、操作前進(jìn)行采樣。 20.7.2 采樣方法 (1)布點(diǎn)方法；室內(nèi)面積≤30Cm2，設(shè)內(nèi)、中、外對(duì)角線3點(diǎn)，內(nèi)、外點(diǎn)布點(diǎn)部位距墻壁IM處；室內(nèi)面積>30M2，設(shè)4角及中央5點(diǎn)，4角的布點(diǎn)部位距墻壁lm處。 (2)平板暴露法：將普通營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板(直徑為9CM)放在室內(nèi)各采樣點(diǎn)處，采樣高度為距地面1.5m，采樣時(shí)將平板蓋打開(kāi)，扣放于平板旁，暴露5min，蓋好立即送檢。 20.7.3 檢測(cè)方法：將送檢的平板置37℃溫箱培養(yǎng)48h，計(jì)數(shù)菌落數(shù)，并分離致病菌
